Prognostic relevance of exercise testing in hypertrophic cardiomyopathy

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2017Background: Resting echocardiography is fundamental in the diagnosis and monitoring of Hypertrophic Cardiomyopathy (HCM), as well as in estimating its severity. Cardiopulmonary exercise testing (CPET) is indicated to complete the evaluation of HCM patients and stress echocardiography is often used to assess symptoms. However, current guidelines still do not incorporate any type of exercise testing for risk stratification in HCM, inclusively of sudden cardiac death. Objective: The aim of this work is to review the evidence on the relevance of exercise testing in determining the prognosis in HCM. Methods: A systematic review was conducted for eligible publications, between 2010 and 2016, that included evaluation of outcomes and prognosis. In these studies, patients underwent exercise echocardiography and/or cardiopulmonary exercise testing, performed according to predefined protocols. Diverse parameters were assessed in order to determine which were relevant for the prognosis. Analysed outcomes included death from any cause (including SCD and other causes of cardiovascular death), equivalents of sudden death, heart failure requiring hospitalization or progression to New York Heart Association classes III or IV, cardiac transplantation, sustained ventricular tachycardia, stroke, myocardial infarction and need of therapy to relieve left ventricular outflow tract obstruction. Results: 12 publications were included, corresponding to a total of 4655 patients. The mean follow-up period varied between about 1 and 8 years. “Classical” risk factors for sudden death were generally present in less than half of the patients and these were not always considered predictors of long-term outcomes. The main findings of this set of studies revealed that the major predictors of outcomes were abnormal heart rate recovery, atrial fibrillation during exercise, exercise wall motion abnormalities, lower peak VO2 and higher VE/VCO2. Conclusions: Although most studies concluded that exercise testing is a safe and useful tool to determine the prognosis in HCM, further investigation on this topic, regarding the question of whether it adds independent value to the current risk stratification strategies, is needed.Introdução: A Miocardiopatia Hipertrófica (MCH) é uma doença miocárdica, na grande maioria das vezes de causa genética, por mutações em genes que codificam proteínas sarcoméricas, com um padrão de hereditariedade autossómico dominante. É uma causa comum de morte súbita cardíaca (MSC), insuficiência cardíaca (IC) e arritmias, sobretudo fibrilhação auricular (FA). Embora os doentes possam permanecer assintomáticos ou com sintomas pouco significativos durante vários anos, muitas vezes também se apresentam com capacidade reduzida para o exercício, que pode dever-se a vários mecanismos, nomeadamente a obstrução do tracto de saída do ventrículo esquerdo (OTSVE), a isquémia do miocárdio e a disfunção sistólica e/ou diastólica do ventrículo esquerdo (VE). O diagnóstico é baseado em critérios estabelecidos, tais como os da Sociedade Europeia de Cardiologia (SEC), tendo em conta sobretudo a espessura da parede ventricular esquerda (≥15 milímetros num ou mais segmentos, medidos por qualquer técnica de imagem, que não seja explicado por aumento da pós-carga). A ecocardiografia em repouso é fundamental no diagnóstico e monitorização da MCH, bem como na avaliação da severidade da doença e no prognóstico. A prova de esforço cardiorrespiratória está, neste momento, indicada para completar a avaliação dos doentes com MCH e a ecocardiografia de esforço é frequentemente utilizada com o objectivo de identificar e avaliar os sintomas. Contudo, as guidelines actuais não incorporam nenhum tipo de prova de esforço na estratificação de risco na MCH, nomeadamente de MSC. Objectivo: O objectivo deste trabalho é rever sistematicamente a evidência científica publicada sobre a relevância dos testes de esforço (tanto ecocardiográficos como da prova de esforço cardiorrespiratória), na determinação do prognóstico na MCH. Métodos: Foi realizada uma revisão sistemática com inclusão de publicações elegíveis, cujos critérios de inclusão foram: estudos prospectivos ou retrospectivos, realizados em humanos, com idade superior a 18 anos, publicados nos últimos 5 anos (entre 2010 e 2016), em língua inglesa, no qual fossem satisfeitos os critérios de diagnóstico da MCH e em que fossem realizados testes de esforço, com electrocardiograma (ECG) e/ou ecocardiograma e/ou prova de esforço cardiorrespiratória e que incluíssem outcomes e prognóstico. Nestes estudos, os doentes foram submetidos a uma avaliação clínica inicial, tendo em conta antecedentes pessoais, sintomas cardiovasculares, história familiar de MCH e/ou MSC em idade precoce, medicação habitual no momento do ensaio clínico, história de cirurgia cardíaca e/ou terapêutica médica para aliviar os sintomas de OTSVE, existência de uma janela acústica adequada para realizar ecocardiograma e a capacidade de realizar testes de esforço. A avaliação incluiu ainda, geralmente, a realização de ECG e ecocardiograma transtorácico em repouso (em modo M, bidimensional e estudo Doppler). Diversos parâmetros foram avaliados, de forma a determinar quais eram relevantes para o prognóstico: no caso do ecocardiograma, tanto em repouso como em esforço, a espessura máxima da parede ventricular esquerda, a fracção de ejecção do VE (FEVE), o gradiente de pressão máximo do tracto de saída do VE (TSVE), o movimento sistólico anterior da válvula mitral (SAM), a existência de regurgitação mitral, a sua gravidade e o seu aparecimento ou agravamento com o esforço, o diâmetro transversal da aurícula esquerda (AE), o volume indexado da AE e as alterações da contractilidade segmentar; no caso da prova de esforço cardiorrespiratória, o consumo de oxigénio no pico do esforço (VO2), a relação entre a ventilação por minuto e a produção de dióxido de carbono (VE/VCO2), a relação de trocas respiratórias no pico do esforço (rácio de trocas respiratórias), definido pelo rácio entre VCO2 e VO2 no pico do esforço e o limiar anaeróbio. Foram também avaliados, a intervalos regulares durante os testes de esforço, a frequência cardíaca e a pressão arterial. Os outcomes avaliados incluíram morte por qualquer causa (incluindo morte súbita, morte decorrente de IC progressiva ou outra), equivalentes de morte súbita (descarga apropriada de cardioversor desfibrilhador implantável – CDI – ou reanimação bem sucedida de paragem cardíaca), IC que requeresse internamento hospitalar ou progressão de classes I e II da New York Heart Association (NYHA) de IC para classes III e IV, transplante cardíaco, taquicardia ventricular mantida, acidente vascular cerebral (AVC), especialmente se no contexto de FA, enfarte do miocárdio (EM) e necessidade de terapêutica para aliviar a OTSVE. Resultados: Foram incluídas 12 publicações, correspondendo a um total de 4655 doentes. A ecocardiografia de esforço foi utilizada na maioria dos artigos seleccionados, sendo que em alguns foi associada prova cardiorrespiratória, e em dois foi apenas realizada esta última. O tempo médio de follow-up variou entre 1 e 8 anos. Os factores de risco “clássicos” para morte súbita (síncope, história familiar de MSC, taquicardia ventricular não mantida, pressão arterial (PA) com resposta anormal ao exercício e espessura da parede ventricular esquerda> 30mm) estavam presentes em menos de metade dos doentes e em dois estudos não foi comprovada associação a piores outcomes(1,2). Os principais resultados deste conjunto de estudos revelaram que os melhores preditores de outcomes foram a recuperação anormal da frequência cardíaca, FA durante o exercício, anomalias da contractilidade segmentar durante o esforço, decorrentes da ocorrência de isquémia miocárdica, o consumo máximo de oxigénio durante o exercício (VO2 no pico) (bem como a percentagem prevista de VO2 no pico) reduzido e VE/VCO2 elevado, sendo os dois últimos parâmetros relacionados com a intolerância ao esforço que, em dois dos artigos, só estavam associados a alguns dos outcomes, nomeadamente IC e transplante cardíaco, e não a MSC, provavelmente porque os mecanismos promotores de arritmia ventricular e disfunção da contractilidade são diferentes. O limiar anaeróbico reduzido não demonstrou ser tão bom preditor de outcomes como os outros dois parâmetros anteriormente referidos. A FEVE reduzida, que é um factor de risco de prognóstico cardiovascular global previamente identificado, é também relevante neste contexto. Relativamente a alguns dos parâmetros avaliados na ecocardiografia, tais como a OTSVE, os índices indirectos de disfunção diastólica (nomeadamente o diâmetro da AE) e a regurgitação mitral induzida pelo exercício, foram obtidos resultados contraditórios nos vários artigos, não permitindo concluir se estariam ou não associados a piores outcomes. Conclusões: Apesar de a maioria dos estudos ter concluído que as provas de esforço são uma ferramenta segura e útil na determinação do prognóstico da MCH, é necessária uma maior investigação relativamente ao valor adicional e eventual inclusão nas actuais estratégias de estratificação do risco

3dways internationalization project - Sme competitiveness field lab 2019/2020

3DWaysisa3Dprintingservice-providingcompany.Currently,thecompanywantstointernationalizeitsremotelymanagednetworkof3Dprintingfactories,specificallytargetingatthehealthcaresector.Therefore,thisprojectanalysesthecurrentandfuturestateofthe3DPrintingindustry,beforeassessingpotentialtargetmarkets.Subsequently,fivecountries,headlinedbytheUnitedKingdom,weredeterminedtobethemostsuitableforthecompany’sinternationalizationthatwillrelyondirectexportingasanentrystrategybecauseoftheuniquenatureofthenetwork.Complementary,amarketingplanandafinancialevaluationweredevelopedfor3DWaysintheUK

Impact of accessibility to diverse amenities on the mobility patterns of Lisbon inhabitants

Dissertation presented as the partial requirement for obtaining a Master's degree in Information Management, specialization in Knowledge Management and Business IntelligenceRecently smart sustainable cities are becoming popular all over the world and in 2019 Moreno introduced the 15-minute city as a reinterpretation of Perry’s neighborhood unit. The 15-minute city is based on the idea that a city is divided into self-sustainable neighborhoods. There, the inhabitants have access to everything needed from living, working, supplying, caring, learning to enjoying, within 15 minutes on foot or by bicycle. Nevertheless, some criticisms have been made to this chrono-urbanism innovation, such as the risk of segregation and social inequalities. Because of that, population characteristics, their habits and what affects mobility need to be previously known. This study aims to answer how accessibility to diverse amenities influences mobility patterns of inhabitants in the city of Lisbon. Additionally, it incorporates socio-demographic factors. Hence, amenities data from open databases, socio-demographic data from census and mobility data from mobile phones were collected. Accessibility and diversity of amenities were calculated and used together with the socio-demographic characteristics to model mobility in both a global, using linear regression, and local perspective, using geographically weighted regression. Finally, the mobility models were related to other urban phenomena, namely the mean value of rent. The study revealed that accessibility to health, entertainment, retail, and recreational amenities attracts and retains population. However, these conclusions cannot be generalized to the entire city since the impact of such accessibility on mobility varies geographically. Finally, the results were compared with a similar study developed in Barcelona, enabling to contrast and discern between specific and generalized conclusions

Lipid signalling in grapevine resistance against fungal pathogens

Grapevine (Vitis vinifera L) is one of the most economically important crops worldwide, mostly due to its uses for wine and table grape production. However, it is prone to several diseases. Downy and powdery mildews and grey mold, caused by Plasmopara viticola, Erisiphe necator and Botrytis cinerea, respectively, are among the most devastating ones. Disease control strategies include phytochemical applications every growing season, jeopardizing the sustainability of viticulture. Understanding the molecular processes behind disease resistance or susceptibility is vital to define alternative control strategies and select new disease resistance traits for breeding programs. The identification of molecular markers that allow discriminating tolerant and susceptible grapevine genotypes to their pathogens is an important step to help breeders select genotypes for crossings to produce hybrids with good winemaking and disease tolerance traits. Lipids and lipid-derived metabolites are not only major structural and metabolic constituents of the cell, but they also function as modulators of a multitude of signal transduction pathways evoked by biotic stresses. It has been proposed that specific fatty acids (FA) may be involved in plant resistance against pathogens with different colonization strategies (biotroph, hemibiotroph and necrotroph). Previous results indicate that the content of several FA suffers alterations at early time-points after grapevine inoculation with the biotrophic oomycete Plasmopara viticola. These alterations are linked with reactive oxygen species and Jasmonic acid (JA) associated signalling. Moreover, lipid molecules and their derivatives, including JA, when applied externally, can cause a modulation of the lipid and FA signalling mechanisms in a similar manner to the pathogen challenge. Plants that are exposed to these elicitor molecules show a quicker and more intense defence response upon contact with a pathogen. The extracellular matrix (ie apoplast) is the first battlefield where pathogen recognition occurs and secretion of both defence molecules and pathogen effectors take place. Therefore, the apoplast is one of the most important cell compartments in plant-pathogen interaction. Nonetheless, despite our knowledge on apoplast involvement on several processes from cell growth to stress responses, its dynamics is still poorly known due to the lack of efficient extraction processes adequate to each plant system. Because apoplastic fluid extraction from woody plants is a challenging task, studies regarding grapevine apoplast are still scarce to this day. There are two published studies on the grapevine leaf apoplast proteome and none on its metabolome. In this work, the problems raised above were addressed. The analysis of the constitutive lipid and FA composition of tolerant and susceptible grapevine genotypes to P. viticola was carried out, along with the expression analysis of FA desaturase (FAD) genes. These studies allowed to identify lipids and FA as potential biomarkers for tolerance or susceptibility to P. viticola. The saturated FA, mainly in monogalactosyldiacylglycerol and phosphatidyl choline are candidate tolerance biomarkers and the polyunsaturated linoleic acid (C18:2) as well as the plastidial lipids are candidate susceptibility biomarkers. Moreover, the higher expression levels of FAD4, FAD6 and FAD8 in susceptible genotypes suggest that they might also be considered as candidate biomarkers for susceptibility. The analysis of the total leaf FA composition revealed corroborating results in terms of FA saturation degree and FAD expression, and it is a more rapid and less costly approach (discussed in the chapters II and III). Due to the relevance of the JA mediated lipid signalling in the grapevine-P. viticola interaction, another question that raised was whether this mechanism would be conserved in the interaction with other pathogens with different invasion and/or lifestyles. Therefore, the FA modulation events, crucial for JA synthesis and signalling, were also addressed in the grapevine interaction with E. necator (biotroph, invading the plant leaf in the adaxial page from wound apertures) and B. cinerea (necrotroph). While the interaction with the biotrophs may trigger a higher synthesis of polyunsaturated FA (PUFA) at early time-points with a tendency to return to basal levels, the interaction with B. cinerea may trigger a later and more durable induction of PUFA synthesis. In all interactions, membrane fluidity modulation occurred, which may be crucial to maintain cellular function during infection (discussed in chapter IV). Since lipid molecules and JA showed previously to play important roles in the grapevine defence responses to P. viticola, the potential role of this molecule as a FA signalling trigger was studied. In fact, FA modulation after JA elicitation is similar to that described previously after P. viticola inoculation even in a susceptible cultivar, highlighting the potential of this molecule as an alternative to prevent grapevine diseases (discussed in chapter V). To uncover the lipid signalling events of the first moments of plant pathogen interaction, a thorough analysis of the apoplastic fluid is necessary. A new methodological approach to isolate grapevine leaf apoplast compatible with proteomic and lipidomic based studies was defined. The constitutive metabolome was assessed by FTICR-MS, which allowed the identification of 514 unique putative compounds revealing a broad spectrum of molecular classes. Among them, lipids are the most abundant molecular class. This methodology represents an optimization to the existing protocols and opens the way to study the lipid signalling events in the first battlefield of the grapevine-pathogen interaction (discussed in chapter VI). This work allowed to bring us a few steps closer to the complete disclosure of the grapevine lipid mediated defence mechanisms highlighting also candidate molecules to be used in future breeding programs for disease tolerance

The dispersal of native and introduced seeds by São Tomé forest birds

Tese de mestrado, Biologia da Conservação, Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2016Com a população mundial a aumentar, os impactos antropogénicos nos ecossistemas naturais vão sendo cada vez mais evidentes. Assistimos actualmente a uma elevada taxa de extinção de espécies, e com elas se perdem as funções e os serviços ecossistémicos que prestam, deixando os ecossistemas mais vulneráveis às pressões humanas. Uma dessas funções, essencial à manutenção da dinâmica florestal, é a dispersão de sementes, que nos trópicos é feita essencialmente através de relações mutualistas entre plantas e animais. A eficácia da dispersão pode variar substancialmente em função da espécie dispersora e depende não só da quantidade de sementes que os animais transportam, mas também da qualidade do tratamento que estes proporcionam às sementes. A perda de um dispersor chave num ecossistema pode portanto comprometer a viabilidade das populações de plantas e alterar a dinâmica da vegetação. Os efeitos da perda da biodiversidade são particularmente graves nas ilhas, onde se concentra grande parte das espécies, sobretudo endémicas. Aqui, as espécies evoluíram em isolamento, existindo naturalmente uma menor diversidade de espécies e possivelmente uma menor redundância funcional entre espécies. Estas características fazem com que estes ecossistemas sejam mais frágeis, e é nas ilhas que se tem verificado a maioria das extinções de espécies. Uma das principais ameaças identificadas é a introdução de espécies invasoras, que competem com as espécies nativas, acabando por as excluír. São Tomé é uma pequena ilha oceânica de clima tropical, situada no sistema insular do Golfo da Guiné. Com uma das maiores concentrações de endemismos de todo o mundo, São Tomé está a sofrer as consequências dos impactos humanos, estando a sua biodiversidade bastante ameaçada. Este trabalho tem então como objectivo perceber de que forma as aves estão a contribuir para a dispersão de sementes, uma função ecossistémica essencial para as florestas ricas em endemismos de São Tomé. Para tal, foram definidos três objectivos específicos: (1) avaliar a rede de dispersão de sementes por aves do sub-bosque em floresta de montanha, através da análise dos excrementos de aves capturadas com redes verticais; (2) avaliar a contribuição específica dos pombos como potenciais dispersores de sementes em São Tomé, através da análise de conteúdos de papos de pombos caçados; (3) caracterizar a dispersão de sementes na floresta de montanha, unindo os dados provenientes dos pontos anteriores, ponderados com a abundância relativa das aves. As redes de dispersão de sementes foram construídas analisando as matrizes de interação com o ‘package’ bipartite do programa R. A frequência de interação foi quantificada como o número de excrementos ou papos de cada espécie de ave contendo pelo menos uma semente intacta de cada espécie de planta. Foram capturadas 15 espécies de aves com redes verticais no sub-bosque em floresta de montanha, todas elas endémicas. Confirmámos dispersão de sementes por seis destas espécies, de destacar a contribuição do Olho-grosso (Speirops lugubris), responsável por 88% da frequência de interação. As espécies de plantas nativas dominam esta rede (14 espécies, 70% das espécies identificadas), incluindo algumas espécies endémicas ameaçadas, enquanto que poucas são as espécies introduzidas incorporadas na rede de dispersão (seis espécies, 20% das espécies identificadas). Através de curvas de acumulação de espécies, é possível afirmar que o esforço de captura foi bastante elevado, tendo-se conseguido capturar 71% das espécies de aves que ocorrem na área de estudo e 65% das plantas a serem dispersas. A comparação entre as redes de dispersão de sementes da floresta primária (obô) e da floresta secundária (capoeira) revelou poucas diferenças, o que pode estar relacionado com a proximidade geográfica das áreas de amostragem. Estes resultados sugerem ainda que os dispersores se movem entre os dois tipos de floresta, contribuindo para a disseminação das sementes entre habitats, o que vai facilitar tanto a invasão por espécies introduzidas, como a regeneração de espécies nativas em zonas de floresta degradada. A análise da rede de dispersão de sementes por pombos em São Tomé permitiu verificar a importância das três espécies endémicas caçadas como potenciais dispersores de sementes. Em especial a Rola (Columba malherbii) e o Cécia (Treron sanctithomae), tanto por serem as mais abundantes, como por serem as que mais frequentemente continham sementes no papo. Esta rede é dominada por sementes nativas (53 % da frequência de ocorrência) e apenas uma pequena percentagem de introduzidas (21% da frequência de ocorrência), sendo que uma destas (Cecropia peltata) está incluída na lista das 100 piores espécies invasoras do mundo. Já o Pombo-do-mato (Columba thomensis) é uma espécie mais rara, tendo a sua população vindo a decrescer maioritariamente devido à pressão de caça. É necessária alguma cautela ao analisar estes resultados, uma vez que as sementes nos papos dos pombos teriam ainda de passar por todo o processo de digestão, podendo levar à sua destruição antes de serem depositadas. No entanto, mesmo que poucas sementes resistam à passagem pelo trato digestivo da ave, a probabilidade destas serem dispersas a longa distância é elevada, dada a grande capacidade de voo dos pombos quando comparada com as das restantes aves existentes na ilha. A dispersão de sementes nas florestas de montanha de São Tomé é suportada exclusivamente por aves endémicas, um resultado surpreendente mesmo no contexto de ilhas oceânicas. A grande importância do Olho-grosso como dispersor de sementes resulta não só da frequência com que as dispersa, mas também da sua elevada abundância nestas florestas. Apesar do método utilizado ser dirigido a aves do sub-bosque, foi possível capturar também alguns indivíduos de espécies mais associadas à copa das árvores, como o Neto-de-olho-grosso (Zosterops feae). Foi também possível comprovar que o Pardal (Serinus rufobrunneus) é sobretudo um predador de sementes, já que apenas uma reduzida proporção dos dejectos continha sementes intactas. Os pombos parecem ser quantitativamente pouco relevantes, sobretudo devido à sua abundância reduzida, mas podem constituir importantes dispersores a longa distância e de sementes de maiores dimensões. Foi ainda detetada alguma complementariedade entre os vários dispersores, já que apenas o Tordo (Turdus olivaceofuscus) e o Papafigos (Oriolus crassirostris) foram encontrados a dispersar as sementes maiores (8-10mm). Estes dois dispersores, de maiores dimensões, possuem uma garganta mais larga que lhes permite engolir sementes maiores. A elevada ‘species strength’ destes dispersores reflete isso mesmo: uma grande dependência deles por parte das plantas com sementes maiores, já que estas aves são as únicas capazes de dispersar as suas sementes. O Tchin-tchin-txoló (Ploceus sanctithomae), a Camussela (Ploceus grandis) e o Pastro (Onycognathus fulgidus) já foram observados a consumir frutos e sementes, mas permanecem indicados apenas como potenciais dispersores, pois não foi possível comprovar que desempenhem esta função. Dos nove dispersores de sementes encontrados neste estudo, seis estão ameaçados de extinção, segundo os critérios da IUCN. Este é um facto preocupante, uma vez que a extinção de qualquer um destes dispersores irá ter um impacto negativo na dispersão de sementes, com consequências desconhecidas para a estabilidade do ecossistema. Apesar da importância da dispersão de sementes para a dinâmica florestal, muito pouco se sabe sobre esta função do ecossistema em São Tomé. Este é um trabalho pioneiro nesta área, na medida em que foram dados os primeiros passos para compreender como funciona esta importante função do ecossistema nesta ilha. No entanto ainda há muito por perceber. É preciso uniformizar a metodologia de amostragem e aplicá-la a todos os dispersores e também potenciais dispersores, estendendo a amostragem no espaço e no tempo. É ainda necessário compreender a qualidade do tratamento que cada dispersor dá a cada espécie de planta, inibindo ou aumentando a sua taxa e velocidade de germinação. Para além das aves, focadas neste trabalho, outros grupos de animais terão certamente um papel relevante na dispersão de sementes, nomeadamente os invertebrados, os morcegos frugívoros e alguns dos mamíferos introduzidos, como a Lagaia (Civettictis civetta) e o Macaco (Cercopithecus mona). É também necessário avaliar até que ponto as espécies de plantas introduzidas se comportam como invasoras e de que forma competem com as nativas, diminuindo as suas probabilidades de recrutamento. Finalmente, o transporte das sementes, mesmo que viáveis, não se traduz necessariamente no recrutamento de novos indivíduos: a qualidade do local de deposição é um factor crucial no contributo das aves para a dinâmica populacional dessa planta, e no conjunto, para a dinâmica florestal. Em resumo, esta tese fornece a primeira caracterização da rede de dispersão de sementes de São Tomé, abrindo as portas para um conhecimento mais detalhado e abrangente das interacções biológicas que sustêm as comunidades biológicas nestes ecossistemas.The island of São Tomé, in the Gulf of Guinea, is a biodiversity hotspot with a remarkable number of endemic species and unique forest ecosystems. Much of its biodiversity is currently threatened by the increasing human population and associated habitat change, which is simultaneously threatening ecosystem functions and services. Seed dispersal is one of such key ecosystem services, essential for forest regeneration. The goal of this work is to understand how forest birds are contributing to the dispersal of both native and introduced seeds in São Tomé, providing the first community-level assessment of species interactions in maintaining ecosystem functions in the island. We collected droppings from mist netted birds and analysed the crop contents of hunted pigeons. All 18 sampled bird species were endemic and nine of them were dispersing seeds. The São Tomé Speirops played a central role as seed disperser. The seed dispersal network is dominated by native plant species, with only a few introduced species being dispersed in the forest. We corrected the frequency of occurrence of seeds in the droppings with independent estimates of bird abundance, and showed that this correction is key to understand disperser contribution to the overall network. Birds are therefore playing a double role, facilitating the dispersal of introduced species but also spreading the native flora. These results highlight a difficult conservation dilemma, since birds might be simultaneously contributing to forest regeneration and to biological invasion

O papel da robótica no desenvolvimento de aprendizagens básicas

Relatório de estágio apresentado à Escola Superior de Educação de Lisboa para a obtenção do grau de mestre em Educação Pré-EscolarO presente relatório tem como objetivo relatar de forma reflexiva, crítica e fundamentada a Prática Profissional Supervisionada (PPS) realizada no âmbito do Mestrado em Educação Pré-Escolar, com ênfase no contexto de Jardim de Infância (JI), abordando as intenções definidas para a ação pedagógica. O estudo de intervenção realizado tem como objetivo verificar o impacto da utilização de robôs no desenvolvimento de competências básicas, numa sala de pré-escolar. Avaliaram-se os efeitos da intervenção tendo em conta a capacidade das crianças de (i) identificar números e letras; (ii) demonstrar competências grafo percetivas; (iii) nomear figuras e cores e (iv) realizar somas. Neste estudo participaram dezoito crianças a frequentar um jardim de infância da rede pública, que foram divididas em dois grupos segundo a sua preferência para participar ou não no projeto de robótica, em grupo de intervenção e grupo de controlo. Cada um dos grupos era comporto por um igual número de crianças, sendo que as crianças do grupo de intervenção participaram num projeto desenvolvido tendo em conta a Metodologia de Trabalho por Projeto (MTP). Os resultados obtidos revelam uma progressão significativa entre o pré-teste e o pós-teste em todas as crianças. Isto deve-se ao facto de apesar de apenas ter existido intervenção com um grupo, as crianças conversarem entre si e explicarem aos colegas o que aprenderam, transmitindo os seus conhecimentos ao restante grupo. No entanto, ao comparar as médias dos dois grupos é possível verificar que as crianças que realizaram o projeto apresentam médias superiores na variável somas.ABSTRACT This report’s purpose is to describe in a reflective, critic and reasoned way the Supervised Professional Practice done in the Preschool Education Master’s Degree, with emphasis in the context of Kindergarten, in which the intentions defined for the pedagogical action are showed. The goal of the intervention study that was done was to verify the impact of using robots in the development of basic skills, in a kindergarten’s class. The effects of the intervention were evaluated considering the children’s ability to (i) identify numbers and letters; (ii) demonstrate graph perceptive skills; (iii) name figures and colours; and (iv) perform sums. Is this study participated eighteen children attending a kindergarten of the public network, which were divided into two groups according to their preference to participate or not in the robotics project, the intervention group and the control group. Both groups were formed by and equal number of children, the difference being that the intervention group’s children participated in a project developed considering the Work by Project Methodology. The achieved results reveal a significant progression between the pre-test and the post-test in all the children. That is because even though the intervention only existed with one group, the children talk with each other and they explained to one another what they learned, transmitting their knowledge to the rest of the group. However, comparing the means of the two groups it’s possible to verify that the children that were involved in the project show superior means in the sums variable.N/

Size controlled protein nanoemulsions for cancer therapy

Book of Abstracts of CEB Annual Meeting 2017info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Dual antibiotherapy of tuberculosis mediated by inhalable locust bean gum microparticles

Despite the existence of effective oral therapy, tuberculosis remains a deadly pathology, namely because of bacterial resistance and incompliance with treatments. Establishing alternative therapeutic approaches is urgently needed and inhalable therapy has a great potential in this regard. As pathogenic bacteria are hosted by alveolar macrophages, the co-localisation of antitubercular drugs and pathogens is thus potentiated by this strategy. This work proposes inhalable therapy of pulmonary tuberculosis mediated by a single locust bean gum (LBG) formulation of microparticles associating both isoniazid and rifabutin, complying with requisites of the World Health Organisation of combined therapy. Microparticles were produced by spray-drying, at LBG/INH/RFB mass ratio of 10/1/0.5. The aerodynamic characterisation of microparticles revealed emitted doses of more than 90% and fine particle fraction of 38%, thus indicating the adequacy of the system to reach the respiratory lung area, thus partially the alveolar region. Cytotoxicity results indicate moderate toxicity (cell viability around 60%), with a concentration-dependent effect. Additionally, rat alveolar macrophages evidenced preferential capture of LBG microparticles, possibly due to chemical composition comprising mannose and galactose units that are specifically recognised by macrophage surface receptors. (C) 2017 Elsevier B.V. All rights reserved.National Portuguese funding through FCT - Fundacao para a Ciencia e a Tecnologia [PTDC/DTP-FTO/0094/2012, UID/BIM/04773/2013, UID/Multi/04326/2013, UID/QUI/00100/2013, PEst-OE/QUI/UI4023/2011

Folic acid-tagged protein nanoemulsions with controllable size for cancer therapy

XII Spanish-Portuguese Conference on Controlled Drug DeliveryCancer is one of the most devastating diseases and the conventional chemotherapeutics agents distribute nonspecifically in the body, inducing a number of drawbacks [1, 2]. Protein-based nanoparticles have gained considerable interest as drug delivery devices due to their exceptional characteristics [3, 4]. Additionally, protein-based nanoparticles can also be easily amenable for surface modification and covalent attachment of drugs and targeting ligands [3, 5]. The aim of this work was the development of albumin nanoemulsions as drug delivery systems for cancer therapy. The production of albumin nanoemulsions was achieved by high pressure homogenization of an aqueous solution with an organic solvent (vegetable oil), subjecting the mixture to varying number of homogenization cycles at high pressure. In order to determine the best formulation for therapeutic applications, physicochemical and biological (in vitro and in vivo) characterizations were performed. Albumin nanoemulsions were produced by high pressure homogenization with and without a tri-block copolymer (Poloxamer 407), which presents a central hydrophobic chain of polyoxypropylene (PPO) and two identical lateral hydrophilic chains of polyethylene glycol (PEG). We observed a linear correlation between tri-block copolymer concentration and size – the use of 5 mg/mL of Poloxamer 407 yields nanoemulsions smaller than 100 nm. Molecular dynamics and fluorescent tagging of the tri-block copolymer highlight their mechanistic role on the size of emulsions. Folic acid (FA)-tagged protein nanoemulsions were shown to promote specific folate receptor (FR)-mediated targeting in FR positive cells. Carbon monoxide releasing molecule-2 (CORM-2) was incorporated in the oil phase of the initial formulation. FA-tagged nanoemulsions loaded with CORM-2 exhibited a considerable antitumor effect and an increased survival of BALB/c mice bearing subcutaneous A20 lymphoma tumors (Figure 1). The developed nanoemulsions also demonstrated to be well tolerated by these immunocompetent mice. The novel strategy presented here enables the construction of highly stable, size controlled, functionalized protein-based nanoemulsions with excellent characteristics for active targeting in cancer therapy.Ana Loureiro thanks for a scholarship (SFRH/BD/81479/2011) from Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT). This work has received funding from the European Union Seventh Framework Programme (FP7/2007-2013) under grant agreement NMP4-LA-2009-228827 NANOFOL. This work was supported by FEDER through POFC – COMPETE and by Portuguese funds from FCT through the project PEst-OE/BIA/UI4050/2014. The authors also thank the FCT Strategic Project of UID/BIO/04469/2013 unit, COMPETE 2020 (POCI-01-0145-FEDER-006684), BioTecNorte operation (NORTE-01-0145-FEDER000004) funded by European Regional Development Fund under the scope of Norte2020 - Programa Operacional Regional do Norte and the European Union Horizon 2020 research and innovation programme under grant agreement NMP-06-2015- 683356 FOLSMART.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Preparation and characterization of protein nanospheres prepared by high pressure homogenization

Protein nanospheres have a huge potential as drug carriers due to their proven biocompatibility and biodegradability. Nanospheres can be used for controlled drug release, thus reducing dosage and frequency of drug administration, and therefore of treatment associated toxicity. In this study, nanospheres of bovine serum albumin (BSA) were produced by subjecting a biphasic system, consisting of an aqueous protein solution and an organic solvent, to high pressure homogenization. The effect of BSA concentration and ratio of protein solution/oil was studied in order to determine how these factors affect particle properties. Size, polydispersity and stability of the nanospheres were analyzed with a dynamic light scattering instrument and their morphology was examined by microscopy. As these nanospheres are intended for intravenous injection, size is a key factor. The obtained nanospheres presented adequate small sizes and polidispersity, and demonstrated stability over time. Hence, these proteinaceous particles exhibit characteristics compatible with a potential application as drug delivery systems